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品牌 | 必拓 | |
基础属性 | 生产企业 | 弘业新创抗体技术股份有限公司 |
cas号 | ||
规格 | 20μl | |
储存条件 | ||
纯度 | ||
密度 |
克隆用T载体试剂盒
pBAT-1载体是高效克隆T载体,线性化载体3’-末端含有突出的碱基“T”,可以将3’-末端含有“A”的PCR扩增产物高效率的连接至pBAT-1载体上。本试剂盒中含有的高效连接液Ligation Mixture可以方便的将载体和外源片段进行高效连接,反应产物可以直接用于转化。
产品特色
一步法完成基因克隆与表达载体的构建,所得到的阳性质粒载体可以直接用于表达。节约时间、节约成本。
试剂盒成分
pBAT-7 (70 ng/μl) 20 μl 1支
Ligation Mixture 150 μl 1支
Plbu 150 μl 1支
PNETR 150 μl 1支
保存条件
保存温度:-20 ℃
有效期:12个月
使用方法
1、在微量离心管中配制以下DNA溶液,全量为5μl。
pBAT-1 | 1 μl(70 ng) |
PCR片段 | 适量 |
水 | 补足至5 µl |
2、加入5μl的Ligation Mixture。
3、4℃反应过夜或者16 ℃连接2小时至4小时。将10 μl连接混合液加入100 μl感受态细胞中,冰水浴放置30分钟。
4、迅速置于42 ℃水浴热激2分钟,迅速在冰水浴放置2分钟。
5、加入900 μl 2YT(或LB)培养基,37 ℃,180 rpm振荡培养45分钟。高速离心收集菌体,去掉800 μl上清,留200 μl重悬细胞。
6、将200 μl细胞重悬液涂布在含有相应抗生素的琼脂平板培养基上,37 ℃倒置培养过夜,形成单克隆。挑取单菌落,鉴定阳性克隆。
注意事项
1、Ligation Mixture溶液请于冰水浴中溶解,混匀后再使用。
2、连接反应请在16℃以下进行,温度升高较难形成环状DNA。连接时间控制在4℃反应过夜或者16℃反应2小时至4小时。对于较难连接的反应,可以4 ℃过夜和16 ℃连接2小时交替连接。反应时间过短或者温度高较难筛选得到阳性克隆。
3、为提高克隆鉴定的效率,本试剂盒提供了载体上游引物和载体下游引物,以便于用菌落PCR鉴定阳性插入克隆时使用。也可用作测序引物。
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