PEI MAX粉末配置方法：

1)将1g PEI MAX 40K放入盛有900 mL水的玻璃烧杯中；

2)放入搅拌转子，放置于磁力搅拌器上，设置搅拌程序以形成一个较小的漩涡；

3)等待PEI MAX 40K完全溶解，通常需要5分钟左右；

4)用25 mL塑料移液管加入1 N氢氧化钠滴定至pH 6.9~7.1；

5)如果不小心超过7.1，则使用1N的盐酸和新的塑料移液管将pH重新滴定至6.9~7.1；

6)将溶液转移到1L玻璃量筒中，加入水定容至1L；

7)用无菌真空过滤膜过滤配制的转染试剂溶液；

8)按需分装，4°C储存（切记不可冷冻）；

注：未经配制的粉末有效期为2年。

配置成液体后分装在合适的瓶子中，并且保存在4℃的转染试剂将可在6个月之内保持性能。

如仅用于蛋白定性研究，分装的转染试剂可延长有效使用期至1年。

经过驯化的无血清培养悬浮细胞转染流程

1.准备工作

 转染前 2~3 小时，种植细胞密度为 1X10⁶ /mL 于培养容器中。

2. 转染步骤（以 250mL 摇瓶为例，转染前种植细胞总体积为 25mL，最终总培养体积为 50mL）

准备 PEI-DNA 转染混合物（以下操作顺序尤为关键）。

1)在含有2.5mL（25mL的10%）稀释液的聚丙烯EP管中加入 50ug 质粒 DNA（质粒用量建议在 1~2ug/10⁶ 细胞之间优化，此处使用 2ug/10⁶ 细胞）；

2) 轻轻地混匀/振荡溶液；

3) 在 DNA 溶液中加入 50~200uL PEI 转染试剂（PEI/DNA 的比例建议在 1~4：1之间优化，首次推荐使用 2：1 或 3：1）；

4) 涡旋振荡 5 秒钟；

5) 将管子静置于超净工作台 10~15 分钟，使 PEI-DNA 复合物形成（共孵育时间建议不超过 20 分钟）；

6) 用移液器轻轻上下吹打混合液 3 次；

注：边晃动摇瓶，边将 PEI-DNA 混合液加入更换了培养基的转染孔中，确保 PEI-DNA 复合物均匀分布，防止局部浓度过高。

3. 孵育培养

将细胞培养瓶放入培养箱，摇瓶培养 2~3 小时后，加入25mL新鲜培养基，继续培养。

通常，在转染后36-48小时可检测到重组蛋白表达或包装的病毒颗粒。转染后72-96小时可观察到最大产量。

含血清培养的贴壁细胞转染流程

1. 准备工作

• 转染前18~24小时细胞铺板。

• 在培养基中加入合适数量的细胞，以确保在转染前形成 60~80%汇合度的单细胞层，此为最理想的细胞转染密度。

2. 转染步骤（以 6 孔板单孔举例）

• 转染前 1~2 小时，将需要转染的孔中的培养基替换成 3mL 新鲜的含有2%低血清或无血清的培养基。（高浓度血清抑制PEI的性能，大多数情况下，较低的血清含量(≤ 5%)或无血清将获得较高的转染效率）。

• 准备 PEI-DNA 转染混合物（以下操作顺序尤为关键）。

1) 在含有300uL（3mL的10%）稀释液的聚丙烯 EP 管中加入2ug质粒 DNA；

2) 轻轻地混匀/振荡溶液；

3) 在 DNA 溶液中加入 2~8 uL PEI 转染试剂（PEI-DNA 的比例建议在 1~4：1 之间优化，首次推荐使用 2：1 或 3：1）；

4) 涡旋振荡 5 秒钟；

5) 将管子静置于超净工作台 10~15 分钟，使 PEI-DNA 复合物形成（建议共孵育时间不超过 20 分钟）；

6) 用移液器轻轻上下吹打混合液 3 次

• 边晃动细胞培养板，边将 PEI-DNA 混合液加入更换了培养基的转染孔中，确保 PEI-DNA 复合物均匀分布，防止局部浓度过高。

3. 孵育培养

  • 将细胞培养板放入培养箱培养 18~24（请注意，此处并非常规lipo脂质体转染的 4 小时后换液）小时后，更换含有血清的正常培养基；

  • 通常，在转染后 36-48 小时可检测到重组蛋白表达或包装的病毒颗粒，转染后 72-96 小时可观察到最大产量。