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货号R666005-50T
品牌阿拉丁
品牌类型自有品牌(制造商)
货期40天
-+
品牌 | 阿拉丁 | |
基础属性 | 生产企业 | 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 |
cas号 | ||
规格 | 50T | |
储存条件 | 室温 | |
纯度 | 50 preps | |
密度 |
中文名:RNApure Virus Kit
英文名:RNApure Virus Kit
纯度:50 preps
货号:R666005-50T
包装:50T
存储温度:室温
产品介绍:
本试剂盒采用可以特异性结合病毒RNA的吸附柱和独特的缓冲液系统,适用于从 血清、血浆、尿液、脑脊液等无细胞体液及细胞培养上清液中分离病毒RNA。病毒 RNA特异性地结合到硅基质膜上,而污染物则流过该膜。通过两次高效洗涤完全去除 蛋白质等杂质,然后用无RNase的水或试剂盒提供的RNase-Free Water洗脱高纯度的 病毒RNA。由本试剂盒提取的病毒RNA可直接用于RT-PCR、Real-time RT-PCR和印 迹分析等实验。
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自备试剂:无水乙醇,0.9% NaCl。
实验前准备及重要注意事项
1.向Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解,-20℃保存。 配制好的Proteinase K勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2.预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸 泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
3.血清或血浆避免反复冻融导致蛋白变性或产生沉淀,减少病毒滴度进而影响提取病 毒核酸的产量。
4.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5.Buffer GL如果产生沉淀,可在56℃加热使其溶解后室温放置。
6.所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
操作步骤
1.室温下取200 μl血清或血浆加到1.5 ml离心管(自备)中。 注意:不足200 μl可以加入0.9 % NaCl (客户自备)补足。
2.向上步溶液中加入20 μl Proteinase K,混匀。
3.加入200 μl Buffer GL,涡旋震荡15秒。 注意:不要直接把Proteinase K加到Buffer GL中。
4.56℃ 孵育15分钟,短暂离心,将管壁上的溶液收集到管底。
5.加入250 μl无水乙醇,涡旋震荡15秒,室温孵育5分钟,短暂离心,将管壁上的溶液 收集到管底。
6.将步骤5得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns RS)中,若一 次不能将全部溶液加入吸附柱中,请分两次转入,12,000 rpm(~13,400×g)离心1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7.向吸附柱中加入500 μl Buffer RW1,12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液, 将吸附柱重新放回收集管中。
8.向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇),12,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9.向吸附柱中加入500 μl无水乙醇,12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液, 将吸附柱重新放回收集管中。
10.12,000 rpm 离心3分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底 晾干。
注意:
1)这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、 PCR 等)。
2)推荐步骤:将吸附柱放入一个新的1.5 ml离心管(自备)中,打开管盖,56℃烘箱孵育3分钟, 使吸附柱的膜彻底干燥。
11.将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入20-50 μl RNase-Free Water,室温放置5分钟,12,000 rpm离心1分钟,收集RNA溶液, -70℃保存RNA,防止降解。
注意:
1) RNase-Free Water体积不应小于20 μl,体积过小影响回收率。
2) 如果要提高RNA的产量,可用20-50 μl新的RNase-Free Water重复步骤11。
3) 如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤11。
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