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货号P665534-250U
品牌阿拉丁
品牌类型自有品牌(制造商)
货期40天
-+
品牌 | 阿拉丁 | |
基础属性 | 生产企业 | 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 |
cas号 | ||
规格 | 250U | |
储存条件 | -20°C储存 | |
纯度 | ||
密度 |
中文名:Phi29 DNA Polymerase
英文名:Phi29 DNA Polymerase
货号:P665534-250U
包装:250U
存储温度:-20°C储存
产品介绍:
Phi29 DNA Polymerase是从Bacillus subtilis噬菌体phi29中克隆出的DNA聚合酶, 利用基因重组技术,由大肠杆菌表达。本产品具有高效的DNA连续合成能力及链置换 能力,同时具有3'→5'外切酶校读功能,保真度高。本产品可应用于需要强置换和连续 合成的复制反应及中温条件下高保真度复制,如质粒复制、全基因组扩增等。
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活性定义:
在30℃,10分钟内,将0.5 pmol的脱氧核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量定义 为 1个活性单位(U)。
热失活:
65℃温育10 min即可失活。
质量控制:
经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于95%;经检测无核酸内切酶活性, 无宿主残留DNA。 该酶缓冲液中含有还原剂DTT以便保证其最大酶活性,如果缓冲液不新鲜或经过 反复冻融,使用前应添加4 mM的DTT。
应用实例:
利用Phi29 DNA聚合酶的特殊链置换和连续合成特性,可以大大简化用于测序的环 状质粒制备过程。从细菌培养液中扩增质粒:取1 µl对数中后期新鲜培养物用于以下反应。从平板菌落中扩增质粒:挑取琼脂板上的菌落至10 µl(可变)的双蒸水中,混匀, 取1 µl用于以下反应。扩增已纯化的环状质粒:质粒稀释至1 µg/ml,取1 µl用于以下反应。
1.样品加热变性及引物与质粒退火反应:加入以下组分,震荡混匀并短暂离心后,95℃ 加热3 min,然后置于冰上15 min。
2.扩增反应:在上述反应液中加入以下成分,震荡混匀并短暂离心后,30℃温育过夜。
3.65℃加热10 min,热失活Phi29 DNA Polymerase,终止反应。
4.扩增产物经稀释或纯化后即可用于测序。
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