您好,欢迎来到虫洞时空!
请登录
[买家]
[卖家]
|
免费注册
买家注册
卖家注册
货号O666044-50T
品牌阿拉丁
品牌类型自有品牌(制造商)
货期40天
-+
品牌 | 阿拉丁 | |
基础属性 | 生产企业 | 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 |
cas号 | ||
规格 | 50T | |
储存条件 | -20°C储存 | |
纯度 | ||
密度 |
中文名:One Step Seamless Cloning Mix
英文名:One Step Seamless Cloning Mix
货号:O666044-50T
包装:50T
存储温度:-20°C储存
产品介绍:
产品内容
|
产品说明
无缝克隆技术是一项简单、高效、快速的DNA克隆技术,可将DNA插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。本产品不依赖于T4连接酶,不受截体和目的片段酶切位点的限制,而直接使用同源重组的方法,采用特殊的酶将任意方法线性化后的载体与具有线性化载体两端20-25 bp重叠区域的PCR片段定向重组,50C反应5-15分钟即可快速实现1-5个片段的定向无缝克隆。
产品特点
1.15分钟可以将一个或者多个长、短PCR扩增片段(平/A端) 插入载体。
2.不受载体和插入片段酶切位点的可用性和平端/粘性末端的限制,可以在任意位点 进行克隆。
3.无缝克隆,插入点不会引入不需要的碱基序列。
4.高效、准确,克隆阳性率>95% 。
自备材料与试剂
·插入片段,特异引物,线性化载体 ·高保真PCR试剂
·感受态细胞
·胶回收试剂盒(快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒)
·PCR仪,PCR反应管等。
线性化载体和插入DNA片段的制备回收
1. 线性化载体的制备回收
(1)
选择合适的克隆位点对载体进行线性化,载体线性化方式有两种:限制性内切酶酶
切消化,反向PCR扩增。
酶切所得线性载体,单酶切或者双酶切均可,酶切后推荐用PCR产物纯化试剂盒 或者胶回收试剂盒纯化载体。因无缝克隆产品体系中没有DNA连接酶,所以不会 引起载体自连,重组产物转化后出现的假阳性克隆 (无插入片段) 是由酶切不完全 未线性化环状载体转化而形成的,所以我们推荐酶切后胶回收纯化,可以将未线 性化载体比例降低到最低程度。
(2)
反向PCR扩增得到线性化载体,推荐使用高保真聚合酶扩增,以减少扩增突变
的引入,使用环状质粒为模板时,建议使用内切酶Dpn I对PCR产物进行消化,以
减少环状质粒模板残留引起的克隆假阳性。如果使用Dpn I消化质粒模板,需80℃
加热20分钟失活Dpn I活性,以避免重组反应时残留Dpn I对克隆载体的降解。
2.插入片段的制备与回收
插入片段的制备可用任意PCR酶扩增,克隆过程不受扩增产物平末端或粘末端(A
尾)的影响(重组过程中将被去除,在最终克隆产物中不会出现),但为了减少扩
增突变,特别是点突变实验中,建议使用高保真聚合酶进行扩增。
一般情况下,PCR产物推荐胶回收纯化以降低背景比例,如果插入片段来源于质粒 模板,且该质粒与重组载体具有相同抗性,需用内切酶Dpn I消化PCR产物,以降 低背景,提高阳性率。
3. 插入片段的引物设计原则
单片段引物设计原则:在插入片段正反向扩增引物的5’端引入线性化载体两末端的 同源序列,使扩增后的插入片段两端分别带有和线性化载体两末端对应的同源序列 (20-25 bp不包含酶切位点)
5’-上游载体末端同源序列(20 bp)+酶切位点(可删除)+基因特异性正向扩增引 物序列(20 bp)-3’ 5’-下游载体末端同源序列(20 bp)+酶切位点(可删除)+基因特异性反向扩增引 物序列(20 bp)-3’
多片段引物设计原则:载体两端的引物设计原则与单片段克隆时的原则一致,片段 之间设计重叠区域引物。 多片段引物设计原理:片段A的反向引物包含与片段B的正向引物20-25 bp的重叠区 域和特异引物区域,片段B的反向引物包含与片段C的正向引物20-25 bp重叠区域和 特意引物区域,依次类推,两端片段引物包含线性载体两端的同源序列。
如图示:
2.2 对照反应体系(可选)
|
查看阿拉丁官网此产品相关对应页面:https://www.aladdin-e.com/zh_cn/O666044.html
虫洞平台上的所有商品信息、客户评价、商品咨询、网友讨论等内容,是虫洞时空重要的经营资源,未经许可,禁止非法转载使用。
注:本站商品信息均来自于合作方,其真实性、准确性和合法性由信息拥有者(合作方)负责。本站不提供任何保证,并不承担任何法律责任。
批发价/零售价/专属价:均为商品的销售价,不同性质的单位所看到的价格会有所不同,是您最终决定是否购买商品的依据。 划线价:商品展示的划横线价格为参考价,并非原价,该价格可能是品牌标价或由品牌供应商提供的零售价(如厂商指导价、建议零售价等) 或该商品在虫洞平台上曾经展示过的销售价;由于地区、时间的差异性和市场行情波动,品牌专柜标价、商品吊牌价等可能会与您购物时展示的不一致,该价格仅供您参考。
异常问题:商品的具体售价以订单结算页价格为准;如您发现商品售价或促销信息有异常,建议购买前先联系卖家咨询。