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货号O665690-50T
品牌阿拉丁
品牌类型自有品牌(制造商)
货期40天
-+
品牌 | 阿拉丁 | |
基础属性 | 生产企业 | 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 |
cas号 | ||
规格 | 50T | |
储存条件 | -20°C储存 | |
纯度 | ||
密度 |
中文名:全能型植物RNA提取试剂盒(DNase I)
英文名:OminiPlant RNA Kit (Dnase I)
货号:O665690-50T
包装:50T
存储温度:-20°C储存
产品介绍:
产品内容
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产品简介
本试剂盒适用于从多种植物中提取RNA,即便是从多糖多酚含量丰富的植物中也能成功提取高质量的RNA,如水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、烟草叶、松针、银杏叶、杨树叶、石榴叶、冬青叶、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、枇杷、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆、花生、玉米、马铃薯块茎、月季花瓣、石榴花瓣,香菇、平菇等样本。独特的裂解液配方,可使细胞中的RNA酶迅速灭活,有效去除多糖多酚对RNA提取的影响,无需苯酚、氯仿等试剂,同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化,提取的总RNA纯度高,无基因组、蛋白质和其它杂质的污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和体外翻译等多种下游实验。
RNA得率
自备试剂:β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)
实验前准备及重要注意事项
1.预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头。
2)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2.提取的样品避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
3.Buffer RLS如果产生沉淀,请加热使其溶解后室温放置。
4.Buffer RLS在使用前请加入β-巯基乙醇,1 ml Buffer RLS加20 μl β-巯基乙醇。加入 β-巯基乙醇的Buffer RLS室温可保存1个月。
5.第一次使用Buffer RW2前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
操作步骤
1.匀浆处理:取50-100mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末,加入500 μl Buffer RLS (使用前请先检查是否加入β-巯基乙醇),立即涡旋剧烈震荡混匀。
注意:对于含水量极其丰富的材料,如西瓜果肉,西红柿,梨果肉等,可以适当多加入些材料,最多可增加至200mg;对于富含淀粉的样本或成熟叶片,可适当增加Buffer RLS的用量,最多可增加至700μl。
2.4°C 12,000 rpm(~13,400×g)离心2分钟。
3.将上清液转入已装入收集管的过滤柱(Spin Columns FS)中,4°C 12,000 rpm离心1分钟,小心吸取收集管中的上清并转移至新的RNase-Free 离心管(自备)中, 枪头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
4.缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀),将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱(Spin Columns RM)中,若一次不能将 全部溶液加入吸附柱中,请分两次转入。4°C 12,000 rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
5.向吸附柱RM中加入350 μl Buffer RW1,4°C 12,000 rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6.配制DNase I 混合液:取52 μl RNase-Free Water,向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer和20 μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80 μl的反应液。
7.向吸附柱中直接加入80 µl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
8.向吸附柱RM中加入350 μl Buffer RW1,4°C 12,000 rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9.向吸附柱RM中加入500 μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 4°C 12,000 rpm 离心1 分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
10.重复步骤9。
11.4°C 12,000 rpm离心2分钟。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12.将吸附柱RM装入新的RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5 ml)中,向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50 μl RNase-Free Water,室温放置2分钟,4°C 12,000 rpm离 心1分钟,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
注意:1) RNase-Free Water体积不应小于30 μl,体积过小影响回收率。
2) 如果要提高RNA的产量,可用30-50 μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3) 如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤12。
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