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货号N666081-50T
品牌阿拉丁
品牌类型自有品牌(制造商)
货期40天
-+
品牌 | 阿拉丁 | |
基础属性 | 生产企业 | 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 |
cas号 | ||
规格 | 50T | |
储存条件 | -20°C储存 | |
纯度 | ||
密度 |
中文名:Nc-细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
英文名:Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit
货号:N666081-50T
包装:50T
存储温度:-20°C储存
产品介绍:
产品内容
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产品简介
Nc-细胞核/浆蛋白抽提试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细 胞核和细胞浆蛋白,所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂 裂解细胞膜,释放细胞浆蛋白,然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过细胞核蛋白抽提 试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高,有效避免核/浆蛋白的交叉 污染,可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
注意事项
1.如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂。
2.所有样品操作请置于冰上进行。
3.可根据具体实验情况调整试剂用量,保证各试剂使用比例为Nc-Buffer A:Nc-Buffer B:Nc-Buffer C=100:5.5:50。
4.可以采用更高的速度来离心。
操作步骤
I 细胞中胞浆、胞核蛋白的提取
1.请在蛋白抽提前取出抽提试剂Nc-Buffer A和Nc-Buffer C进行预冷
2.收集细胞,计数。离心去上清。
3.1×107 细胞中加入1 ml Nc-Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail),涡旋5秒以充分混匀,冰上孵育20分钟。
注意:各种细胞的特性不同,需要根据不同细胞的特性调整Nc-Buffer A的用量,如果蛋白浓度小, 按比例减少Nc-Buffer A及后续Nc-Buffer B、Nc-Buffer C的用量。
4.加入55 μl Nc-Buffer B,涡旋5秒以充分混匀,冰上孵育 1分钟。
5.4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心 15分钟,收集上清(尽量收集干净上清液)至新的 离心管中,-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6.向上步所得的沉淀中加入500 μl Nc-Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail),涡旋5秒以充分混匀,重悬沉淀,冰上孵育40分钟,每隔10分钟涡旋混匀一 次,每次约15-30秒。
7.4℃ 12,000 rpm离心15分钟,收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中,-20℃ 保存(此提取液为胞核蛋白)。
II 组织中胞浆、胞核蛋白的提取
1.取材,保存组织。
2.在蛋白抽提前取出抽提试剂Nc-Buffer A和Nc-Buffer C进行预冷。
3.称组织重量,每100 mg组织中加入1 ml Nc-Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3 分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail),用匀浆器在冰上充分匀浆,放置在冰上孵 育20分钟。
注意:各种组织的特性不同,需要根据不同组织调整Nc-Buffer A的用量,如果蛋白浓度小,按比例 减少Nc-Buffer A及后续Nc-Buffer B、Nc-Buffer C的用量。
4.加入55 μl Nc-Buffer B,涡旋5秒以充分混匀,放置在冰上孵育 1分钟。
5.4℃ 12,000 rpm离心 15分钟,收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中, -20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)
6.向上步所得的沉淀中加入500 μl Nc-Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail),涡旋5秒以充分混匀,重悬沉淀,冰上孵育40分钟,每隔10分 钟涡旋混匀一次,每次约15-30秒。
7.4℃ 12,000 rpm离心15分钟,收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中,
-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。
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