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货号G665666-200T
品牌阿拉丁
品牌类型自有品牌(制造商)
货期40天
-+
品牌 | 阿拉丁 | |
基础属性 | 生产企业 | 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 |
cas号 | ||
规格 | 200T | |
储存条件 | 室温 | |
纯度 | 200 preps | |
密度 |
中文名:金牌超量质粒小提试剂盒
英文名:GoldHi Plasmid Mini Kit
纯度:200 preps
货号:G665666-200T
包装:200T
存储温度:室温
产品介绍:
产品内容:
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产品简介:
本试剂盒适合提取1-5 ml菌液,在碱裂解法裂解细胞的基础上,通过新型硅基质膜 高效专一的结合质粒DNA,每个吸附柱最高可吸附40 μg的质粒DNA,同时采用特殊的 缓冲液系统,有效去除蛋白等杂质。由本试剂盒所得质粒的得率和纯度均较高,且质 量稳定,适用于细胞转染、DNA测序、PCR、基于PCR的突变、体外转录、转化细 菌、内切酶消化等下游实验。
自备试剂:无水乙醇、异丙醇。
实验前准备及重要注意事项:
1. 所有组分可在干燥、室温(15-30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2-8℃可保 存更长时间,加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可稳定保存6个月。 2.Buffer P1在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入),混 匀,置于2–8℃保存。使用前需在室温中放置一段时间,恢复至室温后使用。
3.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4.使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀,如有结晶或沉淀现 象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
5.注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物质,请戴手套操作,使用后应立即盖紧盖 子。
6.提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素 有关。
7.吸附柱(Spin Columns DM)的最大容积为750 μl,如果样品体积大于750 μl可分 批加入。
操作步骤
1. 取1-5 ml过夜培养的菌液,加入离心管(自备)中,13,000 rpm(~16,200×g)离心1 分钟收集细菌,尽量吸弃全部上清。
2.向留有菌体沉淀的离心管中加入200μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A), 使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮细菌沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,使提取量和纯度偏低。
3.向离心管中加入200μl Buffer P2,温和地上下颠倒混匀8-10次,使菌体充分裂解。此 时溶液应变得清亮粘稠。
注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如 果溶液未变得清亮,提示可能菌量过大,裂解不彻底,应减少菌体量或者按比例增加P1、P2、E3和 异丙醇用量。
4.向离心管中加入200μl Buffer E3,立即上下颠倒混匀8-10次,此时出现白色絮状沉 淀。13,000 rpm离心5分钟。
注意:Buffer E3 加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。
5.向已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中加入260 μl 异丙醇后,立即加入步 骤4收集到的上清液,上下颠倒混匀。
注意:加入异丙醇后应立即加入上清并混匀,避免异丙醇久放后滴入收集管。吸附柱的最大容积为 750 μl,若样品体积大于750 μl,可将异丙醇和上清液收集在离心管(自备)中混匀,分批过柱。
6.13,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7.向吸附柱中加入400 μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),13,000 rpm离 心1分钟,倒掉收集管中的废液。
8.将吸附柱置于一个新的收集管中,向吸附膜的中间部位加入50-100μl Buffer EB, 13,000 rpm离心1分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意:1)为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟, 13,000 rpm离心2分钟,将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时, Buffer EB在65-70℃水浴预热,可以增加提取效率。
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