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货号F665667-40ml
品牌阿拉丁
品牌类型自有品牌(制造商)
货期40天
-+
品牌 | 阿拉丁 | |
基础属性 | 生产企业 | 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 |
cas号 | ||
规格 | 40ml | |
储存条件 | -20°C储存 | |
纯度 | ||
密度 |
中文名:2×Flash PCR MasterMix (Dye)
英文名:2×Flash PCR MasterMix (Dye)
货号:F665667-40ml
包装:40ml
存储温度:-20°C储存
产品介绍:
产品内容
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产品简介
本品是由一款新型高效的快速DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂 和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。本产品为康为世纪独创的新型快速DNA聚合 酶,具有极高的扩增速度与稳定性,延伸速度可达5 s/kb,最短十五分钟完成PCR,长 片段(大于3 kb)或者复杂模板可以采用10-30 s/kb的延伸速度或者较多循环数。独创 的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,同时复杂模板也能得到有效扩增,超过 98%的PCR扩增能一次成功。使用时只需要加入DNA模板和引物,补足水即可反应, 可最大限度地减少人为误差、降低污染和节约时间。 本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测。扩增得到的PCR 产物3′端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆,并适用于康为无缝克隆试剂盒、T4连接试剂盒和感受态产品。 本产品主要适用于超快PCR、复杂模板、复杂二级结构、对高保真性有要求的基 因克隆等实验和大规模基因检测。
质量控制
经检验无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增多种基 因组中的单拷贝基因。
使用方法
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条 件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
PCR反应体系
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注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的 浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
PCR反应条件
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注意: 1)注意:对于简单模板,预变性时间可控制在30 s-1 min,对于复杂模板如菌液等,预变性时间 可增加至2 min。
优化参数设定
1. 模板DNA量设定:
模板过量可能导致非特异性扩增或smear。50 μl PCR反应体系中模板DNA推荐使 用量如下:
-人基因组DNA 5 ng-500 ng
-大肠杆菌基因组DNA 50 pg-100 ng
-质粒DNA 10 pg-1 ng 1. 30-35 个循环数
2 .引物浓度设定: 引物浓度可设为0.1 μM-1.0 μM之间。引物浓度过低时可能导致扩增产物少。引物 浓度过高会抑制特异性扩增,可能导致非特异性扩增。
3. 退火温度设定: 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率 时可适当降低退火温度;发生非特异性反应时可适当提高退火温度。对于复杂模 板,需要调节退火温度实现高效扩增。
4. 延伸时间设定: 延伸时间应根据所扩增片段大小设定。以下为推荐的延伸时间: 质粒等简单模板:5-15 s/kb; 常规基因组、cDNA模板:10-15 s/kb; 复杂模板、粗提模板:20-30 s/kb; (延伸时间不宜过短应至少在5 s/kb以上,也不宜超过30 s/kb)。
5.
循环数设定:
可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果
循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前
提下应尽量减少循环次数。
查看阿拉丁官网此产品相关对应页面:https://www.aladdin-e.com/zh_cn/F665667.html
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