中文名：2×Flash Hot Start MasterMix (Dye)

英文名：2×Flash Hot Start MasterMix (Dye)

货号：F665646-40ml

包装：40ml

存储温度：-20°C储存

产品介绍：

产品内容 

产品简介

  本品是由一种新型高效的DNA聚合酶、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定 剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。内含新型高效热启动酶，能够在低温条件下 有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。本品具有极高的扩 增速度与稳定性，延伸速度可达5-15 sec/kb，适用于快速PCR反应，独创的MasterMix 配方使整个反应体系非常稳定，超过98%的PCR扩增能一次成功，同时复杂模板也能 得到有效扩增，并可最大限度地减少人为误差和污染。本产品已加入染料（蓝色）， 反应结束后可直接进行电泳检测。扩增得到的大部分PCR产物3′端附有一个“A”碱基， 因此可直接用于T/A克隆。主要适用于快速PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等 实验。 

质量控制

经检验无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增多种基 因组中的单拷贝基因。

使用方法

以下举例为以人基因组DNA为模板的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模 板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1. PCR反应体系

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物 的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。 

2. PCR反应条件

注意：如扩增样本为菌液需增加“预变性95℃ 5min”步骤。 

优化参数设定

1． 模板DNA量设定： 模板过量可能导致非特异性扩增或smear。50 μl PCR反应体系中模板DNA推荐使 用量如下： 

-人基因组DNA 5 ng-500 ng 

-大肠杆菌基因组DNA 50 pg-100 ng 

-质粒DNA 10 pg-1 ng 

2． 引物浓度设定：

 引物浓度可设为0.1μM-1.0 μM 之间。引物浓度过低时可能导致扩增产物少。引物 浓度过高会抑制特异性扩增，可能导致非特异性扩增。 

3． 退火温度设定： 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率 时可适当降低退火温度；发生非特异性反应时可适当提高退火温度。对于复杂模 板，需要调节退火温度实现高效扩增。 

4． 延伸时间设定： 延伸时间应根据所扩增片段大小设定。以下为推荐的延伸时间： 质粒等简单模板：5-15 s/kb； 常规基因组、cDNA模板：10-15 s/kb； 复杂模板、粗提模板：20-30 s/kb； （延伸时间不宜过短应至少在5 s/kb以上，也不宜超过30 s/kb）。 

5． 循环数设定： 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果 循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前 提下应尽量减少循环次数。  

查看阿拉丁官网此产品相关对应页面：https://www.aladdin-e.com/zh_cn/F665646.html