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品牌 | 阿拉丁 | |
基础属性 | 生产企业 | 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 |
cas号 | ||
规格 | 200T | |
储存条件 | 室温 | |
纯度 | 0.1-1ml | |
密度 |
中文名:血液基因组柱式小量提取试剂盒
英文名:Blood Genomic DNA Mini Kit
纯度:0.1-1ml
货号:B665530-200T
包装:200T
存储温度:室温
产品介绍:
产品内容:
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产品简介
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过 的血液样品)、血浆、血清、血沉棕黄层、淋巴细胞、无细胞体液等样本中提取总 DNA,包括基因组DNA,线粒体DNA及病毒DNA。本品可以处理0.1-1 mL的全血,最 高得率可达30 μg,可纯化获得大小为100 bp到50 kb的DNA,纯化的DNA产量高、质 量好,最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染,可直接用于PCR、荧 光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。
自备试剂:无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项:
1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2.本试剂盒最多可以提取0.1-1 mL全血样品或1×107个白细胞。
3.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水 乙醇。
4.使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GL 于56℃水浴孵育重新溶解。
5.试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。
操作步骤:
1.样品处理: 1a. 提取200 uL血液样品时,向离心管(自备)中加入样本后,可直接进行下一步实验。 1b. 当血液样本量小于200 μL时,加入Buffer GR补足至200 μL,再进行下一步实验。 1c. 当血液样本量超过200 μL时,加入1~2.5倍体积的Buffer RCL,轻轻涡旋或颠倒混匀, 12,000 rpm(~13,400×g)离心1分钟,小心吸弃上清液,如果沉淀中还有红色, 可以重复以上步骤一次。然后向沉淀中加入200 μL Buffer GR,震荡至彻底混匀,再 进行下一步实验。 1d. 如果处理血液样本为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血,其红细胞为有核 细胞,血液样本量为5-20 μL,可加入Buffer GR,补足至200 μl后进行后续实验。 注意:如果下游试验对RNA敏感,可加入4 μL RNase A(100mg/mL)溶液,震荡15秒,室温放置5 分钟。RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:CW0601S。
2.向以上溶液中加入20 μL Proteinase K,混匀。
3.加入200 μL Buffer GL,震荡至彻底混匀。 注意:不要将Proteinase K和Buffer GL进行预混。
4.56℃孵育10分钟,其间颠倒混匀数次。 注意:孵育10分钟DNA的产量已经达到最大,继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。
5.加入200μL无水乙醇,颠倒混匀数次。短暂离心,使管壁和壁盖上的液体集中到管底。
6.将步骤5所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM)中,若一 次不能加完溶液,可分多次转入。12,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸 附柱重新放回收集管中。
7.向吸附柱中加入500 μL Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 12,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 注意:如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组,建议重复步骤7。
8.向吸附柱中加入500 μL Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇),12,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8。
9.12,000 rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底 晾干。 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)
10.将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μL
Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12,000 rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有
很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值
低于7.0时洗脱效率不高。
2)如果要提高DNA的终浓度,可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,室温放置2-5分钟,
12,000 rpm离心1 分钟。
3)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并
于-20℃保存。
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