概述

Cell Counting Kit-8，简称CCK-8试剂盒或CCK8试剂盒，是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，其在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜formazan。活细胞的数目越多，则颜色越深。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

与传统的MTT 法相比CCK8具有明显的优势：

1.MTT 法生成的甲臜不是水溶性的，需要使用DMSO 等有机溶剂溶解；而CCK-8 产生的甲臜是水溶性的，省去了溶解步骤，因此减少了该操作步骤带来的实验误差。
2.由于CCK-8 产生的甲臜是水溶性的，无需吸掉培养基后，再用DMSO 等有机溶剂溶解，非常适合用于悬浮细胞的活性测定。
3.与MTT 方法相比，CCK-8 法线性范围更宽，灵敏度更高。
4.CCK-8 法对细胞无毒性，可以多次测定，选取最佳测定时间。
5.CCK-8 法无需配制，即开即用。
6.CCK-8 法适合大规模、高通量的样品检测。
本公司的CCK-8试剂盒为进口分装产品，与日本同仁化学研究所提供的CCK-8试剂盒几乎完全一样，二者的实验差异极小（在5%左右，相当于不同批次之间的差异）。本公司该试剂盒具有极佳的性价比。

使用方法
1.在96 孔板中配制100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时（在37℃，5% CO2的条件下）。
2.向培养板加入10 μL 的待测药物进行处理。
3.根据实验需要，将培养板在培养箱孵育一段时间 （例如：6, 12，24 或48 小时）。
注：如果不进行药物处理而直接测定细胞的活性，则不需要2-3 步骤，直接从第4 步操作。
4.向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D 值的读数）。
5.将培养板在培养箱内孵育2-4 小时。
6.用酶标仪测定在450 nm 处的吸光度。
7.如果暂时不测定OD 值，可 以向每孔中加入10 μL 1% SDS（w/v） 溶液或者 0.1 M HCl 溶液，并盖上培养板盖子，在室温条件下避光保存。24 小时内吸光度不会发生变化。

注意事项

1.由于96 孔板周围一圈最容易蒸发，周围一圈建议不用，改加PBS或水。
2.CCK-8 检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应。如果待测体系中存在还原剂（例如一些抗氧化剂），可能会干扰检测结果，需设法去除其影响。
3.当使用标准96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL培养基)，且加入CCK-8后孵育的时间长一些。
4.如果细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化，应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8 检测。
5.酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除只含有培养基的对照孔中本底的吸光度而消除，因此不会对检测结果造成影响。