ECL化学发光底物（特超敏） 

产品简介：

ECL化学发光底物（特超敏）可为使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联物的免疫印迹实验提供明亮的信号和低皮克级检测灵敏度。该ECL底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。 

用途：

用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。

产品特点：

1、低皮克级灵敏度：检测硝化纤维素膜或PVDF膜上飞克级的蛋白条带；

2、长信号持续时间：在条件优化情况下，经底物孵育的印迹条带能够持续输出6-8小时的可检测光信号；

3、稳定试剂：工作液在24小时内保持稳定；

4、成像方法：适用于X射线胶片、CCD或激光凝胶成像仪；

5、价格经济：针对稀释的抗体浓度条件进行了优化：

0.2至 1.0 µg/mL一抗（以1 mg/mL储存液稀释1:1,000至1:5,000倍）

10至 50 ng/mL二抗（以1 mg/mL储存液稀释1:20,000至1:100,000倍）

6、简单易用：可替代其它公司的ECL发光底物，操作步骤无需进行特别优化；

使用方法:

1、执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意用HRP标记IgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。

2、Western Blot最后一次洗膜的同时配制新鲜发光工作液：分别取等体积的溶液A和B，放入干净容器中混合。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

3、用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(0.125mL发光工作液/cm²膜)中，使膜与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。

4、滤纸上沥干膜上发光工作液。但勿洗去发光液。

5、打开X光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜，去除气泡和皱褶。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。

6、暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。建议第一次曝光 60 秒，之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前 5-30 min期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时，但强度会随时间下降，如有底物孵育后较长时间后曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。

注意事项：

为获得最佳效果，需优化该系统，包括样品量、一抗和二抗浓度、膜和封闭试剂的类型。

1、没有一种封闭试剂对所有系统而言都是最佳的，所以为每一个免疫印迹检测系统找到最合适的封闭缓冲液非常必需。

2、使用亲和素/生物素检测系统时，避免使用牛奶作为封闭试剂，牛奶中含有的不定量内源性生物素会导致高背景信号。

3、实验中避免印迹膜变干。

4、叠氮钠是 HRP 的抑制物，不要使用叠氮钠作为缓冲液的防腐剂。

5、避免手与膜直接接触，实验过程应戴手套或使用干净的镊子。

6、短时间暴露于实验室常规照明不会损害该工作液，但应避免长期暴露在强光下

保存条件：

室温运输，4 ℃密封避光保存一年，短期可放置室温。